Ìtọ́sọ́nà Sáyẹ́ǹsì Ìgbà Ẹ̀ẹ̀rùn: Nígbà tí Ìgbì Ooru 40°C bá pàdé Àwọn Ìdánwò Molecular

Ooru giga ti wa ni gbogbo ilẹ China laipẹ yii. Ni ọjọ kẹrinlelogun oṣu Keje, Ile-iṣẹ Iwa-oorun Agbegbe Shandong ti kede ikilọ iwọn otutu giga ofeefee, ti o sọ asọtẹlẹ iwọn otutu “ti o dabi sauna” ti 35-37°C (111-133°F) ati ọriniinitutu 80% fun ọjọ mẹrin to nbọ ni awọn agbegbe inu ilẹ. Ooru ni awọn ibi bii Turpan, Xinjiang, n sunmọ 48°C (111-133°F). Wuhan ati Xiaogan, Hubei, wa labẹ itaniji osan, pẹlu iwọn otutu ti o ju 37°C lọ ni awọn agbegbe kan. Ninu ooru gbigbona yii, aye kekere ti o wa labẹ oju awọn pipettes n ni iriri awọn rudurudu ti ko wọpọ—iduroṣinṣin awọn acids nucleic, iṣẹ-ṣiṣe awọn enzymes, ati ipo ti ara ti awọn reagents ni gbogbo wọn ni idakẹjẹẹ nipasẹ igbi ooru.

Yíyọ ásíìdì nucleic ti di ìdíje sí àkókò. Nígbà tí ìgbóná òde bá ju 40°C lọ, kódà tí afẹ́fẹ́ bá ń ṣiṣẹ́, ìgbóná tábìlì iṣẹ́ sábà máa ń gùn ju 28°C lọ. Ní àkókò yìí, àwọn àpẹẹrẹ RNA tí a fi sílẹ̀ ní gbangba máa ń bàjẹ́ ní ìlọ́po méjì ju ti ìgbà ìrúwé àti ìgbà ìwọ́wé lọ. Nínú yíyọ ásíìdì magnetic bead, omi ìpamọ́ náà máa ń kún ní agbègbè nítorí yíyọ ásíìdì solvent kíákíá, àwọn kirisita sì máa ń rọra rọ̀. Àwọn kirisita wọ̀nyí yóò fa ìyípadà ńlá nínú ìṣeéṣe ti yíyọ ásíìdì nucleic. Ìyípadà àwọn ohun èlò oníṣẹ́dá ara máa ń pọ̀ sí i ní àkókò kan náà. Ní 30°C, iye yíyọ ásíìdì chloroform máa ń pọ̀ sí i ní 40% ní ìfiwéra pẹ̀lú 25°C. Nígbà tí a bá ń ṣiṣẹ́, ó ṣe pàtàkì láti rí i dájú pé iyàrá afẹ́fẹ́ nínú èéfín èéfín jẹ́ 0.5m/s, kí o sì lo àwọn ibọ̀wọ́ nitrile láti mú kí ó ṣiṣẹ́ dáadáa.

Àwọn àyẹ̀wò PCR ń kojú àwọn ìdàrúdàpọ̀ ìwọ̀n otútù tó le gan-an. Àwọn ohun èlò bíi Taq enzyme àti reverse transcriptase máa ń ní ìmọ̀lára púpọ̀ sí ìyípadà ìwọ̀n otútù lójijì. Ìrọ̀rùn lórí ògiri tube lẹ́yìn yíyọ kúrò nínú firisa -20°C lè fa ìpàdánù iṣẹ́ enzyme tó ju 15% lọ tí ó bá wọ inú ètò ìṣesí. Àwọn ojutuu dNTP tún lè fi ìbàjẹ́ tí a lè rí hàn lẹ́yìn ìṣẹ́jú 5 tí a fi fara hàn sí ìwọ̀n otútù yàrá (>30°C). Iṣẹ́ ohun èlò náà tún máa ń dí i lọ́wọ́ nítorí ìwọ̀n otútù gíga. Nígbà tí ìwọ̀n otútù àyíká yàrá bá ju 35°C lọ tí ìtújáde ooru ti ohun èlò PCR kò bá tó (<50 cm sí ògiri), ìyàtọ̀ ìwọ̀n otútù inú ilé lè dé 0.8°C. Ìyàtọ̀ yìí lè fa kí ìṣiṣẹ́ ìlọ́po méjì ní etí àwo 96 tó ní ihò láti dínkù sí ju 40% lọ. Ó yẹ kí a máa fọ àwọn àlẹ̀mọ́ eruku déédéé (ìkóra eruku náà dín agbára ìtújáde ooru kù sí 50%), kí a sì yẹra fún afẹ́fẹ́ tààrà. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, nígbà tí a bá ń ṣe àwọn àyẹ̀wò PCR ní alẹ́ kan, yẹra fún lílo ohun èlò PCR gẹ́gẹ́ bí “firiji onígbà díẹ̀” láti tọ́jú àwọn àpẹẹrẹ. Ìtọ́jú ní 4°C fún ju wákàtí méjì lọ lè fa kí omi má rọ̀ lẹ́yìn tí ideri gbígbóná bá ti pa, èyí lè sọ ètò ìṣesí náà di omi, ó sì lè ba àwọn irin tí ohun èlò náà fi ń ṣiṣẹ́ jẹ́.

Bí a bá dojúkọ àwọn ìkìlọ̀ tí ó wà ní iwọ̀n otútù gíga, àwọn ilé ìwádìí molecular yẹ kí wọ́n tún dún ìkìlọ̀ náà. Àwọn àyẹ̀wò RNA iyebíye yẹ kí a tọ́jú sí ẹ̀yìn firisa -80°C, pẹ̀lú ààyè tí a kò ní láti wọ̀ sí àwọn àkókò iwọ̀n otútù gíga. Ṣíṣí ilẹ̀kùn firisa -20°C ju ìgbà márùn-ún lọ ní ọjọ́ kan yóò mú kí ìyípadà iwọ̀n otútù burú sí i. Àwọn ohun èlò tí ń mú ooru jáde nílò ó kéré tán 50 cm ti àyè ìtújáde ooru ní ẹ̀gbẹ́ méjèèjì àti ẹ̀gbẹ́ ẹ̀yìn. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, a gbani nímọ̀ràn láti tún àkókò ìdánwò ṣe: 7:00-10:00 òwúrọ̀ fún àwọn iṣẹ́ tí ó ní iwọ̀n otútù bíi yíyọ RNA àti gbígbé qPCR; 1:00-4:00 PM fún iṣẹ́ tí kì í ṣe ìdánwò bíi ìwádìí dátà. Ọgbọ́n yìí lè dènà àwọn òkè iwọ̀n otútù gíga láti dí àwọn ìgbésẹ̀ pàtàkì lọ́wọ́.

Àwọn àyẹ̀wò molikula nígbà ìgbì ooru jẹ́ ìdánwò ọgbọ́n àti sùúrù. Lábẹ́ oòrùn ìgbà ẹ̀ẹ̀rùn tí kò dáwọ́ dúró, bóyá ó tó àkókò láti fi páìpù rẹ sílẹ̀ kí o sì fi àpótí yìnyín kún àwọn àyẹ̀wò rẹ láti jẹ́ kí ohun èlò náà tú ooru púpọ̀ sí i. Ìbẹ̀rù yìí fún ìyípadà otutu ni dídára yàrá ìwádìí tí ó ṣe pàtàkì jùlọ ní àwọn oṣù ìgbà ẹ̀ẹ̀rùn tí ó ń jóná—nígbà gbogbo rẹ̀, ní ooru ìgbà ẹ̀ẹ̀rùn 40°C, àwọn molikula pàápàá nílò “agbègbè polar artificial” tí a ṣọ́ra gidigidi.