Itọsọna Imọ Ooru: Nigbati Igbi Ooru 40°C Pàdé Awọn Idanwo Molikula

Awọn iwọn otutu giga ti duro kọja pupọ ti Ilu China laipẹ. Ni Oṣu Keje ọjọ 24th, Alabojuto Oju oju oju-ojo ti Agbegbe Shandong ti gbejade itaniji iwọn otutu giga ofeefee kan, asọtẹlẹ awọn iwọn otutu “ibi sauna” ti 35-37°C (111-133°F) ati 80% ọriniinitutu fun ọjọ mẹrin to nbọ ni awọn agbegbe inu ilẹ. Awọn iwọn otutu ni awọn aaye bii Turpan, Xinjiang, n sunmọ 48°C (111-133°F). Wuhan ati Xiaogan, Hubei, wa labẹ itaniji osan kan, pẹlu awọn iwọn otutu ti o kọja 37°C ni awọn agbegbe kan. Nínú ooru gbígbóná janjan yìí, ayé tí kò jìnnà sábẹ́ ìdarí àwọn pipettes ń ní ìdààmú àrà ọ̀tọ̀—ìdúróṣinṣin ti àwọn acid nucleic, ìgbòkègbodò àwọn ensaemusi, àti ipò ara àwọn ohun amúnáwá ni gbogbo rẹ̀ jẹ́ ìdákẹ́jẹ́ẹ́ nípasẹ̀ ìgbì ooru.

Nucleic acid isediwon ti di a ije lodi si akoko. Nigbati iwọn otutu ita gbangba ba kọja 40°C, paapaa pẹlu ẹrọ amúlétutù ti wa ni titan, iwọn otutu ti tabili iṣiṣẹ nigbagbogbo n lọ loke 28°C. Ni akoko yii, awọn ayẹwo RNA fi silẹ ni ṣiṣi silẹ diẹ sii ju ilọpo meji ni iyara bi ni orisun omi ati Igba Irẹdanu Ewe. Ni isediwon ileke oofa, ojutu ifipamọ ti kun ni agbegbe nitori isare isare ti epo, ati awọn kirisita ti wa ni irọrun ni irọrun. Awọn kirisita wọnyi yoo fa awọn iyipada nla ni ṣiṣe ti imudani acid nucleic. Awọn ailagbara ti Organic olomi posi ni nigbakannaa. Ni 30°C, iye iyipada chloroform pọsi nipasẹ 40% ni akawe si 25°C. Lakoko iṣẹ, o jẹ dandan lati rii daju pe iyara afẹfẹ ninu iho fume jẹ 0.5m / s, ati lo awọn ibọwọ nitrile lati ṣetọju imunadoko aabo.

Awọn adanwo PCR dojukọ paapaa awọn idamu iwọn otutu ti o nira sii. Awọn reagents gẹgẹbi Taq henensiamu ati yiyipada transcriptase jẹ ifarara pupọ si awọn iyipada iwọn otutu lojiji. Condensation lori awọn odi tube lẹhin yiyọ kuro lati firisa -20°C le fa pipadanu iṣẹ ṣiṣe enzymu ju 15% ti o ba wọ inu eto ifaseyin. Awọn ojutu dNTP tun le ṣafihan ibajẹ ti a rii lẹhin iṣẹju 5 kan ti ifihan si iwọn otutu yara (> 30°C). Iṣiṣẹ ohun elo tun jẹ idiwọ nipasẹ awọn iwọn otutu giga. Nigbati iwọn otutu ibaramu yàrá jẹ> 35°C ati imukuro ooru ti ohun elo PCR ko to (<50 cm lati odi), iyatọ iwọn otutu inu le de ọdọ 0.8°C. Iyapa yii le fa ṣiṣe imudara ni eti awo-daradara 96 ​​kan lati ju silẹ nipasẹ 40%. Awọn asẹ eruku yẹ ki o sọ di mimọ nigbagbogbo (ikojọpọ eruku n dinku ṣiṣe ṣiṣe itusilẹ ooru nipasẹ 50%), ati pe o yẹ ki o yago fun imuduro afẹfẹ taara. Pẹlupẹlu, nigbati o ba n ṣe awọn idanwo PCR ni alẹ kan, yago fun lilo ohun elo PCR bi “firiji iṣelọpọ” lati tọju awọn ayẹwo. Ibi ipamọ ni 4°C fun diẹ ẹ sii ju awọn wakati 2 le fa condensation lati dagba lẹhin ti ideri gbigbona tilekun, diluting eto ifaseyin ati pe o le ba awọn modulu irin irin naa jẹ.

Dojuko pẹlu awọn ikilọ iwọn otutu ti o tẹsiwaju, awọn ile-iṣere molikula yẹ ki o dun itaniji naa. Awọn ayẹwo RNA iyebiye yẹ ki o wa ni ipamọ si ẹhin firisa -80°C, pẹlu wiwọle si ihamọ si awọn akoko iwọn otutu giga. Ṣiṣii ilẹkun firisa -20°C diẹ sii ju igba marun lojoojumọ yoo mu awọn iyipada iwọn otutu pọ si. Awọn ohun elo ti o nmu ooru-giga nilo o kere ju 50 cm ti aaye ifasilẹ ooru ni ẹgbẹ mejeeji ati awọn ẹgbẹ ẹhin. Pẹlupẹlu, a ṣe iṣeduro lati tunto akoko idanwo: 7: 00-10: 00 AM fun awọn iṣẹ-iṣan-iwọn otutu gẹgẹbi isediwon RNA ati ikojọpọ qPCR; 1: 00-4: 00 PM fun iṣẹ ti kii ṣe idanwo gẹgẹbi iṣiro data. Ilana yii le ṣe idiwọ ni imunadoko awọn oke giga otutu lati kikọlu pẹlu awọn igbesẹ to ṣe pataki.

Awọn adanwo molikula lakoko igbi igbona jẹ idanwo ti ilana mejeeji ati sũru. Labẹ oorun ooru ti ko ni ailopin, boya o to akoko lati fi pipette rẹ silẹ ki o ṣafikun apoti yinyin afikun si awọn ayẹwo rẹ lati jẹ ki ohun elo naa tu ooru diẹ sii. Ibọwọ fun awọn iyipada iwọn otutu jẹ deede didara ile-iyẹwu ti o niye julọ lakoko awọn oṣu ooru ti o gbona—lẹhinna, ninu ooru 40°C ti ooru, paapaa awọn moleku nilo iṣọra iṣọra “agbegbe pola atọwọda.”