Awọn ifosiwewe kikọlẹ ni awọn aati PCR

Lakoko ọrọ pcr, diẹ ninu awọn ifosiwewe awọn ifosiwewe nigbagbogbo ni igbagbogbo pade.
Nitori idojukọ ti o ga pupọ ti pcr, ni a ka pe a ka pe o jẹ ọkan ninu awọn okunfa pataki julọ ti o ni ipa lori awọn abajade PC ati pe o le gbejade awọn abajade rere eke.
Bakanna pataki jẹ awọn orisun oriṣiriṣi ti o yori si awọn abajade odi. Ti ọkan tabi diẹ sii awọn ẹya ara ti pcr adalu tabi aṣáájú ẹjẹ funrararẹ ni idiwọ pẹlu, oluranlọwọ iwadii le ṣe idiwọ. Eyi le ja si ṣiṣe idinku ati paapaa awọn abajade odi eke.
Ni afikun si idiwọ, pipadanu ero ile-pẹlẹ nutletic acid acid acidly acidly le waye nitori gbigbe gbigbe ati / tabi awọn ipo ibi-itọju saju si igbaradi ayẹwo. Ni pataki, awọn iwọn otutu giga tabi ibi ipamọ ti o pe le ja si ibajẹ ti awọn sẹẹli ati awọn acids eenu. Ẹrọ ati atunse ti ara ati ifikọ ilẹ parafding ti mọ awọn idibajẹ DNNA ti o mọ daradara ti idamu DNA ati iṣoro itẹlera (wo awọn nọmba 1 ati 2). Ni awọn ọran wọnyi, paapaa ipinya ti aipe ati isọdọmọ kii yoo ṣe iranlọwọ.

Olusin 1 | Ipa ti ẹwá lori iduroṣinṣin DNA
Agarose gelcrophoresis fihan pe didara DNA ti gbe lati awọn apakan paraffin ti autoppees yatọ. DNA ti awọn gigun gigun oriṣiriṣi wa lọwọlọwọ ni awọn iyọkuro da lori ọna atunṣe. DNA ti wa ni itọju nikan nigbati o ba wa ni ti o wa titi di awọn ayẹwo diatora ati ni awọn ohun elo didoju afẹsẹgba. Lilo ti bouin egún apọju ti o ni agbara tabi aito, awọn for-ti acid focalin ti a yọrisi ni ipadanu pataki ti DNA pataki kan. Ida ti o ku ti wa ni pigq.
Ni apa osi, ipari awọn ege ti a fihan ni awọn orisii kidibe (KBP)

Nọmba 2 | Ipadanu ti iduroṣinṣin ti awọn ibi-afẹde ti acid
(a) A) aafo lori awọn okun mejeeji yoo ja si isinmi ni DNA ibi-afẹde. Amuṣiṣẹpọ ti DNA yoo tun waye lori ipin kekere. Sibẹsibẹ, ti aaye alakoko kan ti sonu lori awọn idaya DNA, titobi ila laini kan waye. Ninu ọran ti o wuyi julọ, awọn ege le ṣe agbekalẹ ara wọn, ṣugbọn awọn iyọrisi yoo jẹ awọn ipele iṣawakiri kekere ati isalẹ.
(b) Ipadanu awọn ipilẹ, nipataki nitori ipode ati didasilẹ dinku, nyorisi idinku ninu nọmba awọn hi-blẹ ati idinku ninu TM. Lakoko ipele igbo igbo ti lapapọ, awọn alakoko yoo yo kuro ni Matrix DNA ati kii yoo ṣe arun paapaa labẹ awọn ipo ipasẹ ti o dinku.
(c) Awọn ipilẹ thesine nitosi fọọmu TT jẹ dibasu.
Iṣoro miiran ti o wọpọ ti o waye ni awọn iwadii molucular ni idasilẹ ti o ṣeeṣe ju-ti o ṣeeṣe ti idojukọ awọn acids ti a ṣe afiwe si isediwon phenol-chlorofram. Ni awọn ọran ti o gaju, eyi le ni nkan ṣe pẹlu awọn aifọwọyi eke. Elo akoko le wa ni fipamọ nipasẹ sise pmining tabi tito nkan lẹsẹsẹ ti awọn idoti sẹẹli, ṣugbọn ọna yii nigbagbogbo jẹ abajade prcric kekere ti ko to kacly.

Idibajẹ iṣẹ polyserase lakoko imifisi

Ni gbogbogbo, idalẹnu ni a lo bi imọran ti apoti lati ṣe apejuwe gbogbo awọn okunfa ti o yori si awọn abajade PCRPIPTIMAL. Ninu oye biochemical ti o muna, awọn idiwọ jẹ opin si iṣẹ-ṣiṣe ti henensiamu, ie, o dinku tabi idilọwọ awọn oniwe ti DNA Powermerotion tabi EG, MG2 + fun Taq DNA Poleyrease).
Awọn paati ninu apẹẹrẹ awọn apoti tabi awọn iyọkuro ti o ni awọn isọdọtun taara le ṣe idiwọ taara (fun apẹẹrẹ awọn ọlọjẹ), nitorinaa wọ awọn polymases ati eke awọn abajade iyara.
Sibẹsibẹ, ọpọlọpọ awọn ibaraenisepo laarin awọn irinše awọn kikọ ati awọn afojusun-ti o ni acids awọn acidic acids tun ṣe apẹrẹ bi 'Prr inhibitors'. Ni kete ti otitọ ti sẹẹli ti ni idiwọ fun ipinya ati awọn ibaraenisọrọ ti tu silẹ, awọn ibaraenisepo laarin apẹẹrẹ ati ojutu agbegbe ati alakoso to nipọn ati alakoso to nipọn le waye. Fun apẹẹrẹ, 'Awọn oniṣẹ-ọja' le ṣe agbedemeji- tabi dimeji DNA ti ko ni agbara-ti ko ni agbara ati dabaru nipasẹ idinku nọmba awọn fojusi ti bajẹ.
Ni gbogbogbo, awọn idiwọ PCR wa ni awọn fifa ara pupọ ati awọn afikun ti a lo fun awọn idanwo iwadii ile-iwosan (um2 + ọra, awọn irin iyebiye)

Diẹ ti o gbilẹ PRC inbibinibi naa le ṣee ri ni awọn ọlọjẹ ati awọn sẹẹli eturotic, DNA-ibi-afẹde ti DNA, DNA-binging macromalecles ti awọn iṣupọ iwọn ati awọn ohun elo risita bi awọn ibọwọ ati awọn pilasiti. Irisi mimọ ti awọn acids
Loni, awọn ohun elo isediwon iṣiṣẹpọ darapọ mọ ọpọlọpọ awọn ilana Afofowoyi, ṣugbọn imularada 100% ati / tabi isọdọmọ ti ko ni aṣeyọri rara. Awọn ifalọkan ti o le tun le wa ni awọn acidi imu acidifiisi ti o wẹ tabi o le ti mu ipa ti tẹlẹ. Awọn ọgbọn oriṣiriṣi wa lati dinku ikolu ti awọn inhibitors. Yiyan ti polymamerase ti o yẹ le ni ipa pataki lori iṣẹ ṣiṣe inhibitor. Awọn ọna ti a fifihan si dinku ifalọkan PRC n pọ si ifọkansi polyleze tabi lilo awọn afikun bii BSA.
Ifarapa ti awọn aati PCR le ṣe afihan nipasẹ lilo iṣakoso didara ti abẹtẹlẹ (IPC).
A gbọdọ mu itọju kuro lati yọ gbogbo awọn atunse ati awọn solusan miiran ninu ohun elo isediwon, bii Ettanol, GSD, ni akoko fifẹ. O da lori ifọkansi wọn, wọn le mu ṣiṣẹ tabi pa pcr.